Phát hiện axit nucleic coronavirus mới

Phát hiện acid nucleic có đặc điểm chẩn đoán sớm, độ nhạy và độ đặc hiệu cao, là “tiêu chuẩn vàng” để chẩn đoán viêm phổi mạch vành mới.Hiện nay, công nghệ RT-PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực được sử dụng rộng rãi nhất.Nói chung, hai mục tiêu nằm trên gen ORF1ab và N của vi rút được phát hiện.Cùng một mẫu bệnh phẩm phải đáp ứng mục tiêu kép dương tính hoặc thử nghiệm lặp lại làm mục tiêu đơn dương tính, hoặc hai mẫu bệnh phẩm phải đáp ứng mục tiêu đơn cùng một lúc để xác nhận dương tính với axit nucleic của vi rút SARS-CoV-2.

1. Nguyên tắc của bộ phát hiện axit nucleic?Trình tự gen duy nhất của virus được sử dụng làm mục tiêu phát hiện.Thông qua khuếch đại PCR, trình tự DNA mục tiêu mà chúng tôi chọn tăng lên theo cấp số nhân.Mỗi chuỗi DNA được khuếch đại có thể được kết hợp với một đầu dò được đánh dấu huỳnh quang mà chúng tôi đã thêm vào trước.Tạo ra tín hiệu huỳnh quang, càng nhiều gen mục tiêu được khuếch đại, tín hiệu huỳnh quang tích lũy càng mạnh.Trong các mẫu không có virus, vì không có sự khuếch đại gen đích nên không thể phát hiện được sự gia tăng tín hiệu huỳnh quang.Do đó, phát hiện axit nucleic thực chất là để xác định xem có axit nucleic của virus trong mẫu hay không bằng cách phát hiện sự tích tụ của các tín hiệu huỳnh quang.

2. Các loại mẫu thử axit nucleic là gì?

Nói chung, gạc mũi, gạc họng, gạc mũi họng, đờm, dịch rửa phế quản, dịch rửa phế nang, v.v.

3. Phát hiện năm bước Quy trình phát hiện coronavirus mới yêu cầu năm bước: lấy mẫu, lưu giữ mẫu, bảo quản, chiết xuất axit nucleic và kiểm tra trên máy tính.Điều này đòi hỏi các thí nghiệm khoa học nghiêm ngặt để hoàn thành.

1. Lau thành sau của tăm bông và amidan hai bên họng mỗi bên 5-10 lần bằng tăm bông, và tiếp tục xoay tăm bông;

2. Nhân viên y tế phải giữ mẫu, đầu tăm bông nhúng vào dung dịch bảo quản tế bào, đuôi bị gãy.Vặn chặt nắp ống ngay lập tức;

3. Lưu, cho ống mẫu vào túi kín và gửi đi kiểm tra kịp thời, quá trình kiểm tra yêu cầu môi trường vận chuyển nghiêm ngặt, bảo quản ở nhiệt độ 2-8 độ C.

4. Vận hành chiết xuất axit nucleic, chiết xuất axit nucleic từ mẫu vi rút đã bất hoạt để phát hiện tiếp theo và sử dụng thiết bị tự động, chẳng hạn như thiết bị chiết xuất axit nucleic.

5. Phát hiện axit nucleic bằng PCR huỳnh quang, tức là phát hiện bằng máy, phải mất 70-80 phút để chiết xuất trải qua phản ứng khuếch đại PCR huỳnh quang.

4. Các vấn đề với việc phát hiện axit nucleic là gì?

Âm tính giả do lấy mẫu không đúng cách, bảo quản bệnh phẩm không đúng cách, sử dụng nhiều loại bệnh phẩm khác nhau và sử dụng thuốc thử của các nhà sản xuất khác nhau có thể làm cho kết quả xét nghiệm axit nucleic là "âm tính giả" và bỏ sót chẩn đoán;

Yêu cầu cao đối với thiết bị hoặc nền tảng phát hiện, thiết bị RT-PCR có độ nhạy cao đắt tiền, và yêu cầu cao về độ sạch của phòng thí nghiệm và người vận hành;

Xét nghiệm axit nucleic mất nhiều thời gian và thường mất 4-6 giờ để hoàn thành xét nghiệm RT-PCR.Tuy nhiên, xem xét việc vận chuyển mẫu, Trong trường hợp lượng mẫu tồn đọng lớn, kết quả thường có thể được báo cáo ngay sau 24 giờ.Do đó, khi xét nghiệm axit nucleic âm tính, việc bổ sung phát hiện kháng thể IgM và IgG có thể bù đắp những thiếu sót mà xét nghiệm axit nucleic có khả năng gây ra chẩn đoán bỏ sót.